EXAMENES HISTOLOGICOS EN ANIMALES

LARRAÑAGA TORRÓNTEGUI RAMÓN ANTONIO

Médico Veterinario Zootecnista FESC- Universidad Nacional Autónoma de México.

El análisis histológico del material de biopsia es el mejor método de diagnóstico diferencial. El examen microscópico se realiza para detectar pequeños fragmentos de tejido u órganos obtenidos por biopsia y extirpados quirúrgicamente.

El análisis histológico comienza con una evaluación visual del biomaterial y el corte de fragmentos para su estudio. En esta etapa, se identifican errores preanalíticos y fragmentos de la estructura ósea, que posteriormente se envían para descalcificación. La siguiente etapa del estudio histológico es el cableado del biomaterial, en el que se desengrasa y compacta, ya que los fragmentos se mantienen en alcoholes de concentración creciente.

Se realiza una preparación y procesamiento especiales de la biopsia para verter el material en un bloque de parafina. Para ello, se impregna el material histológico con medios especiales, que posteriormente se endurecen formando una masa densa y homogénea, dando lugar a un bloque de parafina. Posteriormente, este bloque se corta con un micrótomo (microtomización). Al microtomar el bloque de parafina terminado con biomaterial, se obtienen secciones delgadas de varias décimas de milímetro de espesor (aproximadamente 1 micrón).

Estas secciones se colocan sobre vidrio y se secan. A continuación, se expone la preparación histológica a diversos colorantes: para la tinción estándar se utiliza el colorante hematoxilina-eosina; para casos más complejos y específicos, existen diversos métodos de tinción. La tinción se realiza para contrastar y visualizar las estructuras histológicas. Tras estas etapas de preparación del biomaterial, las preparaciones terminadas se envían a un patólogo para su análisis al microscopio.

Material a examinar: trozos de tejido. También se utilizan métodos de microscopía óptica, microscopía electrónica y otros métodos de microscopía. - Indicaciones: Neoplasia. Definición y naturaleza de la malignidad. Establecer las causas de muerte del animal. Diagnóstico postoperatorio. Diagnóstico y evaluación del estado de órganos y/o sistemas de órganos. - Preparación del paciente:  depende del método y la ubicación del sitio de recolección del biomaterial. Por lo general, el procedimiento se realiza bajo anestesia general, sedación o anestesia local. Si el material se extrae de la piel, debe limpiarse mecánicamente para eliminar la suciedad.

La biopsia incisional es la toma de una parte, fragmento o varios fragmentos de una formación patológica o de un órgano difusamente alterado para su examen. La biopsia escisional es un método de recolección de material mediante la escisión quirúrgica completa de los tejidos y/o órganos afectados. La biopsia por punción es un método de recolección de material que a menudo se realiza durante la endoscopia utilizando pinzas especiales.

La prueba preanalitica: Es para tumores completos de tamaño pequeño, y fragmentos de órganos, biopsias por punción. Son adecuados hasta 3 fragmentos de tejido no mayores a 4x3x1,5 cm. Para tumores de mayor tamaño y fragmentos grandes, es necesario seleccionar la prueba. La selección del material para el examen histológico se realiza según las normas generalmente aceptadas. La escisión quirúrgica se realiza en el límite entre el tejido sano y el afectado. 1. Seleccionar una zona sin necrosis ni hemorragia, realizar incisiones paralelas cada 0,5-1,0 cm. 2. Colocar la pieza en un recipiente de tamaño adecuado (relación volumen 1:10).

 3. Etiquete el contenedor (tipo, apodo, apellido del propietario, número de historial médico, ubicación del fragmento de tejido colocado en el contenedor). 4. Completar el formulario de derivación (código de cliente, especie, raza, edad, sexo, estado sexual, apodo, apellido del propietario, apellido y datos de contacto del médico tratante, código de prueba, localización, aparición de lesiones, anamnesis). 5. Enviar el histopot con el material y el formulario de referencia completo al laboratorioa una temperatura +2 grados +8 grados С.

Los tumores pequeños (de hasta 2 cm) se envían completos. Los tumores de 1 a 2 cm se inciden para una mejor fijación. Las formaciones mayores de 2 cm se inciden en incrementos de 1 cm (las incisiones son paralelas) o se dividen y se envían en varios histopots. Se acepta enviar pequeños fragmentos de tumor y tejido del borde quirúrgico por separado; en este último caso, los histopots se firman como corresponde (tumor/borde del tumor/borde de resección). En este caso, los fragmentos deben incluir un fragmento que contenga el borde con tejido normal. El material para examen histológico se recolecta antes de utilizar un láser o un electrocauterio para evitar daño térmico al tejido.

Se llena un formulario en el envio adjunto: Nombre completo del propietario, numero de identificación del animal o su apodo, especie, tipo de cría, estado sexual (castrado/no castrado) método de toma de histología, número de objetos enviados, localización de órganos y tejidos, descripción macroscópica del proceso. Marque la zona afectada en el dibujo. Adicionalmente, rellene los datos de la anamnesis, el tratamiento que se está/estaba realizando, si se realizaron otros análisis de sangre, radiografías, ecografías, etc. y adjunte copias de los mismos al formulario. El formato de los resultados es: descripción macroscópica y microscópica de la biopsia con una conclusión diagnóstica del patólogo.

 HISTOLOGICO DE LA PIEL: La dermatosis, pueden ser congénitas o adquiridas.

El examen histológico es uno de los métodos más importantes para el diagnóstico de enfermedades dermatológicas. Puede ser muy útil en casos de: Enfermedades para las que actualmente la histología es el único método fiable de diagnóstico (displasia folicular, cistitis sebácea, enfermedades inmunomediadas y muchas otras) Enfermedades que no responden al tratamiento sin razón aparente. - Enfermedades que presentan síntomas clínicos atípicos

Enfermedades en las que otros métodos de diagnóstico (citología, tricoscopia, cultivo micológico) no dieron el resultado esperado.

 El estudio se considera una de las áreas especializadas más complejas del diagnóstico patomorfológico. Debido a su especificidad, la investigación dermatohistopatológica solo la realizan patólogos con formación de posgrado especializada en este tema y que trabajan en estrecha colaboración con dermatólogos clínicos.

 Es importante saber que, en dermatohistología, con mayor frecuencia que en histología oncológica, el diagnóstico no puede formularse de forma inequívoca, y la respuesta se basará precisamente en las características morfológicas del proceso, junto con una lista de diagnósticos diferenciales y recomendaciones para pruebas aclaratorias en el comentario.

 Esto es una característica de este estudio y no un indicador de la incertidumbre del histólogo. Sin embargo, con la técnica correcta de selección del material y el llenado detallado de los datos complementarios, la histología permite, si bien no establecer un diagnóstico único y definitivo, reducir significativamente la lista de diagnósticos diferenciales, lo que ahorra significativamente tiempo y dinero en comparación con la selección empírica del tratamiento basada en el efecto.

 Para el examen dermatohistopatológico, la información complementaria detallada y completa es aún más importante que en la histología de las enfermedades tumorales. Por lo tanto, se debe prestar atención a:

 

Raza y color. - Los perros y, en menor medida, los gatos, presentan diferencias muy significativas en la estructura normal de la piel y el pelo, y algunos hallazgos histológicos son patológicos en algunas razas y normales en otras. Además, algunas enfermedades de la piel presentan una marcada predisposición racial. - Tratamiento previo y cuánto tiempo hace que se suspendió (si se suspendió): los esteroides alteran considerablemente la composición de las células inflamatorias hasta el punto de desaparecer por completo los cambios importantes para el diagnóstico. Por otro lado, si una biopsia revela una gran cantidad de bacterias y no se han suspendido los antibióticos, podría ser necesario reconsiderar la elección del fármaco, la dosis y la vía de administración.

 La distribución de las lesiones y la presencia de simetría son muy importantes. En muchos casos, esta información permite reducir significativamente la lista de diagnósticos diferenciales.

Para el examen dermatohistopatológico, se envían fragmentos de piel extraídos mediante biopsia. La biopsia cutánea es un procedimiento quirúrgico en el que se extirpa una zona específica de la piel. Se utilizan principalmente dos técnicas de biopsia: La biopsia por punción (del inglés punch, perforador) es un método para extraer material patológico mediante un bisturí tubular especial. Este método permite obtener una muestra cilíndrica de tejido de una altura y un diámetro determinados.

 

La biopsia escisional es una escisión completa de la lesión y del área sana de piel adyacente.

Para la biopsia por punción, en la mayoría de los casos se prefiere un instrumento de 6 mm de diámetro, pero en algunas ubicaciones difíciles (área del párpado, espejo nasal, yemas de los dedos en perros pequeños y gatos) puede ser apropiado utilizar un instrumento de 4 mm de diámetro. La biopsia escisional se utiliza en áreas de la piel que permiten el cierre adecuado del defecto cutáneo para: Lesiones focales grandes (nódulos, úlceras extensas, etc.).

 

En algunos casos - para enfermedades vesiculares y pustulosas (el punzón al girar puede desgarrarlas y hacer que el material no sea diagnóstico) Si se sospecha una enfermedad del tejido subcutáneo (paniculitis, etc.), es posible que la punción no proporcione suficiente profundidad de muestra). Elegir el sitio óptimo para la biopsia en lesiones extensas es complejo y a menudo requiere la consulta con un dermatólogo y un dermatopatólogo experimentados, pero la mayoría de las veces los siguientes son óptimos: En caso de enfermedades pustulosas: vesículas y pústulas intactas (no rotas) de reciente aparición.

 

En casos de alopecia extensa o hipotricosis, zonas con pérdida de cabello más pronunciada; para algunas alopecias, un área con cabello preservado también es óptima para la comparación. A menudo, la precisión del examen histológico de las dermatosis inflamatorias crónicas depende de la etapa de la enfermedad en la que se tomó la biopsia. Las mismas dermatosis, en las etapas aguda, subaguda y crónica, pueden presentar manifestaciones histológicas completamente diferentes. Además, en enfermedades con polimorfismo clínico, la zona de la lesión de la que se tomó la biopsia suele ser determinante.

 

Es necesario evitar el foco de lesiones ulcerativas, así como las zonas con antecedentes conocidos de autotraumatismo prolongado y lamido, ya que la inflamación bacteriana secundaria puede enmascarar el proceso primario.

 

Método: Después de la extracción, los fragmentos de piel deben colocarse lo más rápidamente posible en formalina tamponada al 10% en una proporción de al menos 1:10 (muestra: formalina), evitando el secado, la exposición a antisépticos y otras sustancias agresivas.

 

Al preparar el campo quirúrgico, evite limpiar la superficie del ganglio afectado con antisépticos: esto puede provocar el desprendimiento de costras, dañar la integridad de pústulas, vesículas, etc., así como la pérdida de microorganismos de importancia diagnóstica. No utilice biopsias por punción para hacer frotis para citología; esto da lugar a artefactos graves durante un examen histológico posterior (si es necesario un examen citológico, es mejor utilizar material de los bordes de la herida después de una biopsia o realizar otra biopsia cercana).

 

Para un examen dermatohistológico, se permiten de 1 a 6 fragmentos, incluso de diferentes localizaciones (por ejemplo, espalda, abdomen, labio, párpado, almohadilla plantar). Se recomienda utilizar diferentes recipientes para las muestras de diferentes localizaciones, de modo que se puedan identificar fácilmente al recibir el material en el laboratorio. Unos días antes de la biopsia, se debe suspender el tratamiento con anticoagulantes debido al mayor riesgo de sangrado, así como los antiinflamatorios esteroideos y no esteroideos, ya que pueden distorsionar el resultado al difuminar las manifestaciones morfológicas de la patología. El día de la toma de la muestra, no se deben aplicar medicamentos tópicos en la superficie de la piel examinada.

 

Coloque las muestras de biopsia en un recipiente (histopot) con el volumen adecuado de solución tamponada de formalina al 10%. La proporción de biomaterial: formalina debe ser de al menos 1:10. Etiquete el recipiente: especie, nombre del animal, nombre del propietario y localización anatómica. Complete todos los campos del formulario de referencia por ambos lados. Adjunte una descripción o foto del proceso patológico y los resultados de las pruebas de laboratorio. Transportelo a temperatura +2 grados C a +8 grados C ¡No congelar!

 

HISTOLOGICO EN NECROPSÍA:  En muchos casos, los cambios en los órganos detectados durante el examen macroscópico son tan insignificantes que no permiten al médico extraer conclusiones sobre la causa de la muerte del animal. Por ello, es necesario un examen histológico de los órganos internos. Para el examen patológico e histológico, se extrae material de cadáveres frescos o animales sacrificados en un plazo máximo de 12 horas, y en verano, de 2 a 3 horas después de la muerte.

 

Una biopsia incorrecta y una fijación tardía devalúan el método de examen histológico y, en ocasiones, son la causa de conclusiones inexactas por parte del patólogo. Una regla importante es la correcta extirpación de los fragmentos de los órganos. Esto debe realizarse con un instrumento muy afilado (un bisturí afilado, una hoja de afeitar, tijeras pequeñas), lo que evita el amasado y la deformación del tejido. Para el examen histológico, se recomienda extraer fragmentos de 0,5 a 1 cm de grosor de los órganos en los que se detecten (sospechen) los cambios más llamativos, lo que puede servir de base para el diagnóstico.

 

Si el área afectada es pequeña, se extirpa por completo junto con un fragmento de tejido adyacente inalterado. En presencia de cambios difusos, se deben extraer fragmentos de diferentes lugares que difieran en color, consistencia, etc. Sin embargo, incluso en estos casos, no solo se deben tomar para examen histológico las áreas afectadas, sino también las aparentemente normales del órgano. Si la estructura del órgano es más o menos uniforme en toda su extensión (hígado, bazo, tiroides y páncreas, etc.), el fragmento con la cápsula se corta de cualquier sección. Partes de órganos con una estructura compleja (riñones, glándulas suprarrenales, etc.) se extirpan de tal manera que se incluyan la corteza y la médula.

 

 En estos casos, las incisiones se realizan en la profundidad del órgano, estrictamente perpendiculares a su superficie. Las paredes de todos los órganos huecos (estómago, intestino, vejiga urinaria, etc.) se examinan en secciones transversales que también pasan a través de todas las capas de la pared. De los tejidos patológicamente alterados (tumores, úlceras, infiltrados, etc.), los fragmentos se extirpan necesariamente en los límites con tejido normal de tal manera que las áreas condicionalmente sanas y alteradas se capturen juntas. Cada órgano se coloca en un histopot independiente, con una proporción de biomaterial: formaldehído de 1:10. El contenedor debe estar etiquetado con el nombre del propietario, el tipo y apodo del animal, y el nombre del órgano.

 

El formulario adjunto debe incluir la especie del animal, su edad, su estado sexual, los signos clínicos de la enfermedad actual, los resultados de las pruebas de laboratorio y las conclusiones sobre los métodos de diagnóstico visual (radiografía, ecografía, tomografía computarizada, resonancia magnética). Al enviar el material, se debe incluir una descripción del cuadro clínico y un informe de autopsia: cambios en el tamaño, color, consistencia, configuración de los órganos, presencia de lesiones alteradas (tamaño, color, consistencia, limitación y forma de los bordes, volumen adicional, etc.). Si durante la autopsia no se encuentran anomalías, se recomienda tomar muestras de los órganos principales: cerebro, hígado, corazón, riñones, pulmones. Si el material procede de un animal que murió hace más de 12 horas, será difícil para el patólogo distinguir entre procesos ocurridos durante la vida y procesos de autólisis (destrucción post mortem).

 

El material de necropsia recolectado para examen histológico puede incluir fragmentos de varios órganos. La proporción entre el volumen total de los fragmentos y el volumen de formalina tamponada al 10 % debe ser de 1:10; es posible utilizar varias histopatologías para mantener esta proporción. Si no se encuentran anomalías durante la autopsia, se recomienda tomar muestras de los órganos principales (cerebro, hígado, corazón, riñones, pulmones). Los fragmentos deben contener el límite de tejido normal y afectado, fragmentos de órganos parenquimatosos (cápsula) y órganos tubulares (todas las capas de la pared).

 

 1. - Seleccionar zonas sin necrosis ni hemorragia, realizar incisiones paralelas cada 0,5-1,0 cm. 2. Coloque las piezas en uno o más recipientes de tamaño apropiado (relación de volumen 1:10). 3. Firme el/el contenedor(es) (tipo, apodo, apellido del propietario, número de historial médico, localización de un fragmento de tejido colocado en un contenedor). 4. Complete el formulario. 5. Enviar el(los) histopot(s) con el material y el formulario de referencia completo al laboratorio.

6. Condiciones de temperatura para el transporte al laboratorio: +2 grados +8 grados.

 

HISTOLOGICO EN DESCALCIFICACIÓN: En el caso de los fragmentos óseos, el proceso difiere del estándar; para obtener secciones histológicas de tejido óseo, es necesario disolver las sales de calcio, es decir, descalcificar el material, preservando así la matriz orgánica del hueso. Las soluciones descalcificantes son reactivos esenciales al trabajar con material óseo.

 

Se utilizan tras la fijación completa del material y permiten la eliminación eficaz de las sales de calcio, preservando al mismo tiempo los elementos celulares de la matriz ósea orgánica. Esto garantiza la producción de micropreparaciones de alta calidad. La solución descalcificante está diseñada para eliminar las sales de calcio del material histológico (tejido óseo, tejidos con calcificaciones). Tras la descalcificación, se pueden utilizar diversos métodos inmunocitoquímicos que permiten la detección de antígenos remanentes (tras el tratamiento ácido).

 

HISTOLOGICO EN NEOPLASÍAS: La tarea más importante del médico clínico es la detección oportuna y el diagnóstico preciso de neoplasias en órganos y tejidos, lo que determina el tratamiento posterior y el pronóstico del paciente. Para ello, el médico envía el área afectada del tejido u órgano para examen histológico, lo que permite obtener resultados detallados sobre los procesos patológicos. Una de las tareas del patólogo durante el examen microscópico de una muestra obtenida para su análisis es realizar el diagnóstico diferencial del proceso patológico. En ocasiones, la tinción estándar con hematoxilina-eosina de una sección no es suficiente, y es necesario realizar un nuevo vidrio histológico con tinción histoquímica adicional, que revela un grado u otro de diferenciación de la neoplasia.

 

La detección de mucopolisacáridos (glicosaminoglicanos) se realiza mediante los siguientes colorantes: Azul alcián pH 0,5 según Mowry. - Azul alcián pH 2,5 según Mowry. - Azul alcián pH 2,5-pH 1,0. - Mucicarmín. - Amarillo metanol. - Hierro coloidal según Mowry.

 

El tejido conectivo se detecta utilizando los siguientes tintes: Tinción de Weigert. Tinción exprés según Weigert. Resorcinol-fucsina según Weigert (para el método exprés). Weigert-Van Gieson.

Expreso Weigert-van Gieson. Orceína. Tinción con azocarmín según Heidenhain. Tinción de Mallory. Picro-Mallory.

 

La microflora se detecta utilizando los siguientes tintes: Fucsina carbol (modificación de Ziehl).

Azul de metileno para el método Ziehl-Neelsen. Azul de metileno de Loeffler. Verde malaquita.

Fucsina básica. Giemsa para la detección de Helicobacter Pylori. Wartin-Starry.

 

La detección de amiloide se realiza utilizando los siguientes colorantes: Rojo congo. Sirius es rojo. Impregnación de plata. Grimelius. Grocott. PASM de metenamina-plata. - Los lípidos se detectan utilizando los siguientes colorantes: Sudán III según Herxheimer. Sudán es negro. Ciertos tipos de hematoxilinas. Hematoxilina según Delafield. Hematoxilina R.T.A.N. Ácido fosfotúngstico. Hematoxilina férrica según Heidenhain.

 

Tintes especiales: Tinción para el diagnóstico de la enfermedad de Wilson. Se utiliza para visualizar acumulaciones de cobre en preparaciones de tejido hepático. Resultado: los núcleos son azules, el cobre es rojo y el rojo anaranjado. - Azul de cresilo brillante. Se utiliza para la tinción supravital de frotis sanguíneos para detectar reticulocitos. - Resultado: sustancia granular-reticular de los reticulocitos – azul. Van Gieson-Fouche. Detección de bilirrubina debido a su conversión en biliverdina por oxidación. La tinción de Van Gieson permite visualizar las fibras de colágeno. Resultado: la bilirrubina es verde; el colágeno, rojo púrpura; el citoplasma, el tejido muscular, el estrato córneo, la neuroglia y los eritrocitos, amarillos.

 

Perls-Van Gieson. Se utiliza para detectar iones férricos, colágeno y otros componentes del tejido conectivo. Resultado: los iones férricos se muestran en azul, el colágeno en rojo púrpura, el citoplasma, el tejido muscular, el estrato córneo, la neuroglia y los eritrocitos en amarillo - Tinción de Koss. Demostración de depósitos de calcio en muestras de tejido. Resultado: los depósitos de calcio son negros, los núcleos son rojos. - Verde de metilo-pironina. Detección simultánea de ADN y ARN en secciones. Resultado: ADN verde pálido, ARN rojo rosado.

Tinción de Felgen. Detección de ADN en tejidos. Resultado: El ADN es rojo brillante.

 

Giemsa. Junto con la solución de May-Grünwald, se utiliza para determinar la composición celular de frotis de sangre y médula ósea. También puede utilizarse para detectar H. pylori en cortes histológicos. Resultados: núcleos: rojo, violeta, púrpura; citoplasma de linfocitos: de azul claro a azul oscuro; citoplasma de monocitos: azul grisáceo; eosinófilos: de rojo ladrillo a naranja; basófilos: violeta oscuro; neutrófilos: de rosa a marrón; eritrocitos: rosa grisáceo. Sirven para diagnostico diferencial.