FIEBRE AFTOSA EN CERDOS (PARTE dos)

RAMÓN ANTONIO LARRAÑAGA TORRÓNTEGUI

MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA FESC-UNAM

 En África ocurren todos los tipos de brotes excepto Asia 1, pero en muchos países, como Sudáfrica, y Marruecos, los brotes han desaparecido recientemente. Sin embargo, la situación real de los brotes que incluyen animales salvajes no se comprende bien en África. En América del Sur, hay tipos O, A y C. Uruguay y Chile han sido aprobados por la OIE como países limpios, y Argentina, Paraguay y el sur de Brasil son casi libres desde 1995. Estas áreas tienen un alto potencial para la industria ganadera y la erradicación de la fiebre aftosa puede tener un impacto significativo en la distribución internacional de productos pecuarios en el futuro.

 Con respecto al tipo A, de 1996 a 1997, en Irán, Tailandia, Malasia, África Occidental ya existe el surgimiento del tipo A, que tiene antígenos y propiedades genéticas significativamente diferentes a los convencionales (La vacuna puede no funcionar) Por esta razón, la Unión Europea ha establecido una barrera de vacunación de emergencia contra Europa al implementar la vacunación de emergencia. Al observar las tendencias recientes en los brotes de fiebre aftosa en el mundo, han surgido nuevas cepas de virus y el brote continúa en algunas áreas, pero, por otro lado, la limpieza está progresando en cooperación con países vecinos e internacionales.

En la transmisión internacional del virus de la fiebre aftosa, existen diversas causas como el ganado infectado, la distribución de granjas y productos pecuarios contaminados, las cocinas contaminadas de barcos y aviones, y los transportados físicamente por el viento, las personas y las aves, los productos pecuarios contaminados y los desechos de cocina fueron las causas más comunes (66%), seguidas por el viento y las aves silvestres ( 22%) Importaciones de ganado infectado (6%), contaminantes y humanos (4%), vacunas inactivadas (3%) y fauna silvestre.

Dado que los animales infectados desarrollan viremia, todos los tejidos como la piel, los órganos, los músculos, la sangre, los ganglios linfáticos y los huesos contienen el virus, que es una fuente de infección. Generalmente, en los animales sacrificados, el ácido láctico, que es un producto glicolítico, se acumula en el músculo y el pH disminuye hasta que comienza el rigor mortis y se alcanza el rigor mortis máximo. Por tanto, el virus de la fiebre aftosa contenido en el músculo se inactiva gradualmente. Esta tendencia es notable en el músculo bovino, y el pH intramuscular del bovino comienza a disminuir a 2 grados C y 3 horas después del sacrificio, y generalmente disminuye a alrededor de pH 5,5 a las 48 horas (pH extremo).

Sin embargo, la disminución del pH debido a la producción de ácido láctico no es tan clara en la carne de cerdo como en la de vacuno y varía de un individuo a otro. Según los resultados experimentales, el pH intramuscular de los cerdos desciende a un pH de 5,5 en 7 horas a 37 grados C, pero en general, a menudo no desciende por debajo del pH de 5,7 en las condiciones del tratamiento corporal. Incluso si el músculo se sacrifica y luego se congela inmediatamente, la producción de ácido láctico se detiene y el virus no se inactiva. Además, los ganglios linfáticos que contienen una gran cantidad de virus, la médula ósea, los granos de sangre que quedan en los vasos sanguíneos grandes del músculo, etc., no se ven afectados por el pH del ácido láctico incluso después de la muerte, por lo que el virus permanece durante un largo período de tiempo.

El virus sobrevivió 182 días, 190 días, 183 días y 89 días en jamón, tocino, grasa de jamón y médula ósea adherida, que fueron saladas y secadas con cerdos infectados experimentalmente. En los cerdos infectados del tracto respiratorio, el virus se propaga en los pulmones, pero la excreción del virus se detiene de 8 a 10 días después del inicio de la enfermedad, y luego el virus no se detecta ni en los pulmones ni en la faringe, pero la infección persistente sin que este establecida. Los animales salvajes como los jabalíes del desierto, responden de la misma forma que los cerdos.

Así, el portador de la fiebre aftosa se encuentra en rumiantes, pero no en el género Cerdo. Actualmente se desconocen la causa y el mecanismo de formación de portadores en sí. Fenomenalmente, las vacas portadoras mantienen títulos de anticuerpos neutralizantes más altos tanto en el suero como en el moco esofágico / faríngeo que las vacas no portadoras. Esto indica que, en el ganado vacuno portador, el virus infecta y prolifera en sitios específicos del esófago y la faringe antes de que la inmunidad local sea efectiva y se establezca una infección persistente.

Se presume que el virus estimula continuamente el sistema inmunológico durante varios meses a varios años hasta que el virus local desaparece y el título de anticuerpos disminuye y desaparece. En cerdos no portadores, el título de anticuerpos neutralizantes alcanza su punto máximo entre el séptimo y el décimo día después de que se detiene la diseminación viral después de la infección inicial, pero el anticuerpo desaparece dentro de 1 a 6 meses después de eso, e incluso el exceso de infección infectado. Los cerdos resistentes son inmunes y la duración es claramente más corta que la del ganado vacuno.

DIGNOSTICO Los países miembros de la OIE están obligados a informar de inmediato a las organizaciones internacionales y países relacionados una vez que se confirme el diagnóstico, y luego se tomarán varias medidas en la frontera con los países relacionados para prevenir epidemias. Por tanto, el diagnóstico de la fiebre aftosa debe realizarse a nivel nacional en cada país. Para prevenir rápidamente las epidemias domésticas, no tiene sentido diagnosticar simplemente la fiebre aftosa. Se requieren varios métodos de diagnóstico que son indispensables para la pronta prevención de epidemias, como la determinación del tipo, la relación con las cepas de la vacuna y las medidas de limpieza.

 Algunos de ellos se pueden implementar en cada país, mientras que otros requieren la cooperación de organizaciones internacionales. Además, los antígenos del virus de la fiebre aftosa son susceptibles a mutaciones y, aunque el virus que una vez fue predominante en la región ha desaparecido, aparecen constantemente virus con nuevas propiedades antigénicas. Por esta razón, se requiere un sistema de diagnóstico global, y la OIE y la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO). México es un país libre de fiebre aftosa, no hay problema de animales portadores que se convierta en un problema en la zona vacunada. Es por eso dado que el paciente excreta el virus antes de que se forme la lesión, es necesario conocer con precisión el destino de envío y la fuente de introducción del ganado desde varias semanas antes del embarque o trasporte.

Recordar que la propagación de la fiebre aftosa es rápida y, si la respuesta se retrasa, el daño se extenderá a una amplia zona y aumentará. Por lo tanto, para tomar medidas eficaces de prevención de la epidemia, es necesario llevar a cabo con prontitud desde la detección de la enfermedad hasta el diagnóstico. El diagnóstico de la fiebre aftosa se realiza según las directrices para el control de enfermedades infecciosas malignas. El método de recolección y transporte del material de identificación de enfermedades, y el diagnóstico de laboratorio regional de la secretaria de agricultura y ganadería.

Cuando ocurra una enfermedad sospechosa de fiebre aftosa, primero notifique al centro de salud ganadera u oficina gubernamental más cercana. Además, estas organizaciones que recibieron el informe lo notificarán de inmediato a la secretaria de Agricultura, ganadería, Silvicultura y Pesca. Es necesario consultar de inmediato a esta secretaria antes de recolectar y transportar materiales de evaluación de enfermedades. Es necesario recolectar epitelio ampollado tan fresco como sea posible para el material de identificación de la enfermedad. El material de diagnóstico para la fiebre aftosa no necesita recolectarse para cada ganado si está en la misma granja, y se puede recolectar epitelio ampollado fresco de una pluralidad de individuos.

 Si el epitelio no está roto, también se puede usar líquido ampollado como material de diagnóstico, por lo que recolecte el líquido contenido por separado con una jeringa o similar. El epitelio de la ampolla debe ser de 2 cm cuadrados o un gramo más en total, y debe suspenderse en la solución de conservación preparada en la instalación de evaluación de enfermedades del Centro de patología animal. Dado que el virus de la fiebre aftosa se inactiva fácilmente por la acidez o la basicidad, el pH de la solución de conservación debe ajustarse estrictamente entre 7,2 y 7,6. Utilice un tampón fosfato esterilizado 1 / 25M mezclado con una cantidad igual de glicerina que la solución de almacenamiento.

 En caso de muerte de un cerdito, el miocardio, los ganglios linfáticos, los órganos principales, etc. se pueden utilizar como material de identificación de enfermedades, pero se debe tener mucho cuidado para evitar la propagación de la contaminación. Si se requiere una autopsia para recopilar datos, debe llevarse a cabo en una instalación de evaluación de enfermedades que pueda incinerarse o desinfectarse intensamente.

Coloque el material de evaluación de enfermedades en un recipiente lleno de una solución conservante, séllelo herméticamente y luego desinfecte la superficie con una solución de carbonato de sodio al 4% o similar. Envuélvalo dos veces para que no se dañe ni gotee, y guárdelo en el refrigerador para evitar que se congele. Además, la sangre también se recolecta y transporta en un refrigerador de la misma manera que el material. Para el transporte, una persona de contacto lo traerá de acuerdo con el procedimiento anterior, pero se utilizará el método más rápido, como el transporte aéreo.

Para las pruebas patológicas, se utiliza un borrador para la detección de antígenos y la reacción de fijación del complemento (CF), métodos de aislamiento de virus y PCR que se pueden tipificar al mismo tiempo, y para las pruebas serológicas, una prueba de neutralización, un borrador para la detección de anticuerpos y la detección de anticuerpos. los métodos que utilizan proteínas virales no estructurales como los antígenos VIA se han convertido en métodos estándar. Al diagnosticar una enfermedad sospechosa de tener fiebre aftosa, de hecho, también se lleva a cabo al mismo tiempo la diferenciación de síntomas de las enfermedades bullosas distintas de la fiebre aftosa.

Método de prueba patológico: La reacción de CF es un método de detección de antígeno desarrollado en 1952. Inicialmente, era un método de probeta, pero ahora es un método micro con una pequeña cantidad. La estructura tridimensional del antígeno viral es importante para la clasificación del tipo de virus de la fiebre aftosa y la fiabilidad de la reacción de FQ que lleva a cabo la reacción antígeno-anticuerpo sigue siendo alta. Las pruebas estas siendo valoradas por ELISA. Para el aislamiento del virus de la fiebre aftosa se ha realizado la inoculación animal utilizando animales susceptibles como cobayas, ratones y bovinos.

Sin embargo, dado que el método de inoculación animal requiere tiempo y dinero, el cultivo celular se usa actualmente para el aislamiento de virus. Históricamente, se han utilizado para el cultivo celular células primarias de riñón de cerdo, células primarias de tiroides de vaca, células BHK derivadas de riñón de hámster, células IBRS2 derivadas de riñón de cerdo y similares. También es necesario preparar células cultivadas de diferentes especies animales teniendo en cuenta la afinidad del aislado con el hospedador. Además, teniendo en cuenta la susceptibilidad del virus de la fiebre aftosa y enfermedades similares, los tipos de células se combinan y segregan.

El virus aislado se identifica mediante el método de detección de antígenos mencionado anteriormente. Además, el material de aislamiento del virus de los animales portadores se recoge mediante el raspado de la mucosidad de la parte superior del esófago de la faringe con una pequeña copa de metal. Dado que los animales portadores portan anticuerpos que neutralizan el virus, el material recolectado se congela y enfría rápidamente antes de ser transportado y utilizado para el aislamiento del virus.

También se ha puesto en práctica un método de diagnóstico genético mediante PCR dirigido a la región del gen de la proteína de la cápside 1D o de la proteína no de la cápside 3D, y ahora es un método indispensable para diagnosticar la fiebre aftosa. Se ha informado de un método de PCR que es posible determinar el tipo que se dirige a la región del gen 1D de la proteína de la cápside, los resultados de este método se limitan a la etapa experimental para un número limitado de cepas de virus y la aplicación a materiales de campo. actualmente no está muy extendido debido a la posibilidad de un diagnóstico erróneo.

Método de prueba serológica: para la prueba de neutralización se utilizan líneas celulares sensibles como las células IBRS2. Sin embargo, las pruebas de neutralización no se pueden realizar, donde está prohibido el uso de virus vivos. Ha habido muchos intentos de ELISA para la detección de anticuerpos del virus de la fiebre aftosa. Sin embargo, como resultado de investigar que la estructura tridimensional del antígeno se mantiene y hay pocas reacciones inespecíficas, y que los anticuerpos pueden detectarse en un único sistema de reacción incluso para un número extremadamente grande de animales hospedadores sensibles, el corriente en fase líquida compite con la prueba ELISA.

En este método, primero, el suero de prueba y una cierta cantidad de antígeno inactivado del virus de la fiebre aftosa se mezclan en una placa de CF para cada tipo de diana para la prueba de anticuerpos, y la reacción primaria antígeno-anticuerpo se lleva a cabo en el líquido. En su primera fase se mide la cantidad de antígeno consumido por el anticuerpo contenido en el suero de prueba mediante el método indirecto, y se cuantifica competitivamente la presencia o ausencia del anticuerpo. Hay un método de detección y un método de medición del título de anticuerpos, y en la medición del título de anticuerpos, un título de anticuerpos de 45 veces o más es positivo.

Las proteínas virales no estructuradas (NS), como los antígenos VIA, se utilizan como antígenos comunes entre tipos y como antígenos para la detección de anticuerpos para probar la infección viral. Es decir, el anticuerpo contra la proteína NS se produce teóricamente solo en el momento de la infección del virus, y el anticuerpo contra la proteína NS no se produce en el individuo inmunizado con la vacuna inactivada que consiste solo en la proteína de la cápside (estructural). Por tanto, la detección de un anticuerpo contra la proteína NS significa una infección viral en el campo, y la prueba de anticuerpos permite distinguir entre el animal vacunado y el animal infectado. Por esta razón, los métodos de prueba de anticuerpos para proteínas NS tienen el potencial de convertirse en un método para detectar animales portadores en áreas vacunadas y se están estudiando en varios países.

Hasta ahora, las proteínas NS L, 2B, 2C, 3A, 3B, 3C, 3D, 3ABC, etc. han sido preparadas mediante tecnología de recombinación de genes o método de síntesis química y método de inmunodifusión, usándolos como antígenos. Se está investigando el método de detección de antígenos. Sin embargo, todavía existen problemas con el método de detección de anticuerpos que utiliza estas proteínas NS como antígenos. Es decir, en cada una de las proteínas NS anteriores, se incorpora una pequeña cantidad a las partículas del virus como la proteína 3D (antígeno VIA), y como resultado, el anticuerpo se detecta incluso en los animales frecuentemente inoculados con la vacuna, de modo que la especificidad es pobre.

Los métodos de detección de anticuerpos que utilizan proteínas NS son indispensables para las técnicas de limpieza posteriores, incluso en el caso poco probable de fiebre aftosa, y su investigación es cada vez más importante en los países limpios. La comparación de antígenos entre cepas virales, como la determinación del tipo o subtipo, se ha realizado tradicionalmente mediante pruebas de fijación del complemento o pruebas de neutralización utilizando sueros inmunes preparados en cobayos. Además, de los problemas convencionales relacionados con la clasificación de subtipos, el análisis estructural de los determinantes antigénicos ha avanzado y la clasificación de subtipos tiene importancia práctica. La clasificación de subtipos convencional, que lleva tiempo preparar sueros inmunes debido a la propagación de nuevos sistemas de prevención de epidemias, como los bancos de vacunas, puede no ser rápido para la selección urgente de cepas de vacunas del banco.

Existen planes para recolectar de manera centralizada anticuerpos monoclonales contra cepas epidémicas en varias regiones y preparar un panel para analizar los antígenos virales con mayor rapidez. Podemos observar que la investigación de las relaciones genéticas entre las cepas de virus se ha convertido en un método importante para aclarar la ruta de transmisión de los virus a nivel internacional y es útil para la prevención de la fiebre aftosa a escala mundial.

Los métodos convencionales han utilizado electroforesis en gel de poliacrilamida de proteínas virales y análisis de patrones de electroforesis de bases mediante el método de huellas dactilares de RNasa T128, pero el método no solo es complicado y requiere mucho tiempo, sino que también el análisis es complicado y los virus. Es la comparación de sólo una pequeña parte del ARN, ahora se realiza el análisis de homología del ARN viral. En particular, el método de análisis de homología para un sitio específico (región 1D) amplificado por el método de RT-PCR tiene la ventaja de que no solo se puede realizar el análisis incluso con una pequeña cantidad de material viral, sino que también se puede establecer una estrecha relación genética entre cepas.